SCI速（sù）遞 | Y染色體AZFc區微缺失檢測技術新研究

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　　遺傳醫學中心主管技師張燕、邵芳成功在中科院分區二區（qū）Microchemical Journal期刊上發表了題為《Establishment and evalsuation of rapid detection of AZFc deletion on Y chromosome based on multienzyme isothermal rapid amplification》的文（wén）章，影響因子4.9。

　　研究成果

　　Y染色體微缺失是導致男性不育的重要遺傳學因素，無精子（zǐ）症因子（Azoospermia factor，AZF）位（wèi）於Y染色體長（zhǎng）臂上，分為AZFa、AZFb、AZFc三個區域，其中AZFc區的（de）缺失率（lǜ）最（zuì）高，該區缺失的（de）患者其精子質量從無到正常，且精子數量會隨著年齡的增長呈進行性下降趨勢。

　　臨床上針對Y染色體微缺失的檢測方法主要有多重實時熒光PCR（Real-time fluorescent quantitative PCR，RT-qPCR）法和多重連接依賴（lài）探（tàn）針擴（kuò）增技術（Multiplex ligation-dependent probe amplification，MLPA），這兩種方法由（yóu）於檢測環境要求高及檢測耗時長的限製，使得Y染色體微缺失很難在基層醫院開展，導致缺失患者不能得到及時（shí）檢測。

　　本研究在多酶恒溫快速擴增（Multienzyme isothermal rapid amplification，MIRA）技術的基礎上結合實時熒光技術和側流層析試紙條（Lateral flow dipstick，LFD)技術開發了兩種快速檢測AZFc區缺失的新方法：三重實（shí）時熒光（RT-MIRA）法（實時顯示擴增曲線）、三重側流層（céng）析試紙條（MIRA-LFD）法（將擴增產物稀釋後加入（rù）三重核酸檢測試紙條中進行（háng）顯（xiǎn）色（sè），5~15min內判讀（dú）結果）。這兩種方法隻需（xū）39℃恒溫（wēn）15~20 min即可完成擴增，具有靈敏度高、特異性強、可靠、快速、經濟等優點，適（shì）用於（yú）包括基層單位在內的醫療機構使用，方便廣大男性及早進行AZFc區檢測。

　　本研究選取了AZFc區（qū）的（de）兩個檢測位點sY254、sY255位點（diǎn），選取Y染色體短臂上性別決定基因（Sex-determining region of Y chromosome，SRY）作為內對（duì）照位（wèi）點，分別設計各位點的RT-MIRA法和（hé）MIRA-LFD法的引物和探針，同時設計各位點的質（zhì）粒模板序列，通過引（yǐn）物和探針（zhēn）濃度優化分別構建三重RT-MIRA法（fǎ）和三重MIRA-LFD法反應（yīng）體係。

　　實驗結果：

　　以質粒為模板，三重RT-MIRA法和三重MIRA-LFD法的檢出（chū）限（xiàn）分別為10 fg/µL和1 fg/µL。

　　以（yǐ）商品化多重RT-qPCR試劑盒（hé）中的陽性對照為模板，兩（liǎng）種新方法和多重RT-qPCR法的最低（dī）檢出限均為295 pg/µL。

　　本研究收（shōu）集了自2018年4月～2023年12月於徐州市婦幼保健院進行Y染色體微缺（quē）失檢測時剩餘的50例自患者外周血（xuè）中提（tí）取的DNA樣本，采用本研究開發的兩（liǎng）種新方法分別對其進行檢測，發現（xiàn）兩種新方法的50例臨床樣本的檢測結果與傳統（tǒng）方法的檢測結果（guǒ）相一致。

　　下圖展示了兩種新方（fāng）法的樣本檢測結果示意圖。

　　文字｜遺傳醫學中心（xīn）

　　編輯（jí）｜李鍾彧

　　審核｜索峰

　　編審｜劉燕敏